Immunohistochimie

L’immunohistochimie (IHC) utilise un anticorps pour localiser un antigène dans une coupe de tissu tout en conservant son contexte microscopique. Un marqueur enzymatique ou fluorescent rend la liaison visible et situe la cible dans un type cellulaire, un compartiment subcellulaire ou une lésion. La technique complète la morphologie, mais son signal dépend autant du tissu et du protocole que de l’abondance de la cible.

Principe technique

Après fixation, inclusion et coupe, un prétraitement peut restaurer les épitopes masqués. L’anticorps primaire reconnaît la cible ; un anticorps secondaire ou un polymère amplifie souvent le signal. Une enzyme transforme ensuite un chromogène en dépôt coloré, ou un fluorophore émet une lumière détectable. Une contre-coloration conserve les repères anatomiques nécessaires à la lecture.

Fixation, durée de conservation, décalcification, récupération antigénique, dilution et temps d’incubation modifient la sensibilité et le bruit de fond. Chez les poissons, de nombreux anticorps commerciaux ont été produits contre des protéines de mammifères. Une similarité de séquence ne garantit ni la reconnaissance de l’épitope ni l’absence de réaction croisée dans une autre espèce.

Validation et témoins

La validation associe une localisation biologiquement attendue, des tissus positifs et négatifs, et si possible une méthode indépendante telle que l’immunoblot ou l’analyse d’un modèle dépourvu de la cible. Le témoin sans anticorps primaire révèle une partie du bruit technique, mais ne démontre pas à lui seul la spécificité du primaire. Les contrôles suivent le même traitement que les échantillons afin de rendre les comparaisons interprétables.

Interprétation

Un marquage se décrit par sa localisation cellulaire, son étendue, son intensité et sa distribution. Une coloration diffuse dans un compartiment inattendu suggère parfois une fixation non spécifique ou un artefact. À l’inverse, l’absence de signal peut résulter d’une faible abondance, d’une perte d’antigénicité, d’un prélèvement tardif ou d’une incompatibilité de l’anticorps.

L’IHC complète l’histopathologie en montrant où se trouve la cible, mais elle ne prouve pas nécessairement qu’un agent est viable ni qu’il cause la lésion. La colocalisation d’un antigène abondant avec des dommages compatibles renforce l’interprétation. Culture, PCR, hybridation in situ ou données cliniques peuvent apporter des éléments différents et complémentaires.