PCR quantitative
La PCR quantitative (qPCR) suit l’amplification génique en temps réel grâce à un signal fluorescent. Le cycle de quantification est lié à la quantité initiale de cible dans les limites de la méthode.
Quantification et contrôles
Une quantification absolue utilise une gamme étalon ; une comparaison relative exige des références et hypothèses explicites. L’efficacité, la linéarité, la limite de détection et la limite de quantification sont évaluées. Les résultats proches de la limite ne doivent pas être présentés avec une précision excessive.
Extraction, inhibition, témoins négatifs et contrôle positif conditionnent l’interprétation. La qPCR détecte une séquence, pas forcément un microorganisme viable. Pour une cible ARN, une transcription inverse précède l’amplification : il s’agit alors de RT-qPCR. La nomenclature, les amorces, les sondes et les critères d’acceptation doivent être documentés.