Amplification génique
L’amplification génique désigne deux phénomènes distincts : la multiplication expérimentale d’une séquence d’acide nucléique, ou l’augmentation biologique du nombre de copies d’un gène dans une cellule. En diagnostic, le terme renvoie le plus souvent à une amplification in vitro, telle que la réaction de polymérisation en chaîne ou PCR.
Amplification expérimentale
La PCR amplifie une région d’ADN comprise entre deux amorces oligonucléotidiques. Chaque cycle associe la séparation des deux brins, l’hybridation des amorces et leur élongation par une ADN polymérase thermostable. Quand l’efficacité est proche de l’idéal, le nombre de copies augmente de façon exponentielle pendant la première partie de la réaction, puis atteint un plateau lorsque les réactifs deviennent limitants.
Un ARN est d’abord converti en ADN complémentaire par transcription inverse avant amplification ; l’ensemble est souvent nommé RT-PCR. La PCR quantitative suit l’accumulation du produit grâce à un signal fluorescent. Elle fournit une quantification relative ou absolue seulement avec des contrôles, une efficacité et un étalonnage adaptés. Des méthodes isothermes, telles que LAMP, amplifient la cible à température constante par des mécanismes différents.
Une amplification peut échouer si la cible est dégradée, si l’échantillon contient des inhibiteurs ou si sa séquence diffère au niveau des amorces. À l’inverse, une contamination par des copies déjà amplifiées peut produire un signal sans rapport avec l’échantillon. Les contrôles positifs, négatifs et d’extraction permettent de distinguer plusieurs de ces situations.
La détection d’une séquence d’un agent infectieux atteste la présence de l’acide nucléique ciblé dans la prise d’essai. Elle ne prouve pas à elle seule que l’agent est vivant, transmissible ou responsable des signes cliniques. L’interprétation dépend de la matrice, du stade de l’infection, de la validation analytique et du contexte épidémiologique.
Sens génomique
Dans une cellule, une amplification génomique correspond à un gain stable ou instable du nombre de copies d’une région chromosomique. Elle peut augmenter la quantité d’un produit génique et contribuer à une adaptation, à une résistance ou à une prolifération tumorale. Ce phénomène est distinct de la technique PCR. Il est caractérisé par des approches mesurant le nombre de copies dans le génome, comme la PCR quantitative calibrée, l’hybridation ou le séquençage.
